为什么蛋白条带比实际分子量大—为什么富含脯氨酸的蛋白会在SDS-PAGE胶中移动得特别慢，显得分子量变大？

一、为什么HF实验测得的相对分子质量会比理论值大

因为HF在气相的时候会通过氢键二聚或多聚，导致实测相对分子质量偏大

二、western杂交出现分子量大于和小于预期蛋白的条带'；原因是什么啊'；？

实际上来说，Western并不能对蛋白质的分子量进行测定，它只是利用一抗二抗显色的步骤从凝胶上定性找到某一蛋白质。
所以分子量大小还是在于电泳的过程。

首先，从电泳的原理上讲，它通过带电基团在电场中的移动来测定分子量，蛋白质的构象（空间形态）对这个影响很大，球蛋白就会比线形蛋白显的分子量小。
而且marker同样有这个问题。

另外，对于western来说，多数都是从生物体中（细胞裂解液）做全蛋白电泳，然后特异性检测某一蛋白的存在，正因如此，蛋白质的一级结构就显的很重要了，毕竟你的预期蛋白是唯一的，而生物表达的蛋白可能就会存在或多或少的差异，分子量自然也就不会完全匹配预期。

三、为什么western blot结果中，蛋白质检测分子量会与计算大小不同

Western ；
blot检测的结果与理论计算值有差异是非常正常的事情Western ；
blot检测最重要的意义在于目的蛋白在某细胞或组织中表达情况的定性。
而目的蛋白检测的大小取决于目的蛋白在SDS-PAGE的结果，也就是说如果目的蛋白在SDS-PAGE上检测结果是偏大的，那么在Western ；
blot转膜后也会是偏大的，这和目的蛋白的结构（糖基化修饰），，组成等等都有关系。
所以只是一个相对的分子量的结果。
要精确检测目的蛋白的分子量结果需要做（）检测

四、为什么富含脯氨酸的蛋白会在SDS-PAGE胶中移动得特别慢，显得分子量变大？

展开全部1.亲水性高，碱性蛋白，结合的SDS数目较少，因此电泳时偏慢              2.因其容易受糖基化修饰，所以其表观分子量较计算出的分子量大

五、蛋白纯化出来后发现实际值比理论值小10KD的原因

这个是发酵表达后分子量就偏小还是纯化后分子量偏小？如果是纯化后，有可能是纯化中找错了目标条带，也有可能是SDS-PAGE检测分子量偏小，那不能说明真的是偏小的，SDS-PAGE是表观分子量，要确认需要质谱或者分子排阻确认。
可以先基因测序确认下构建表达是否正确，如果蛋白质有亲和标签，可以检测WB确认是否还是带着标签的结构。
最后样品可以去质谱检测确认真实分子量

六、凝胶色谱法分离蛋白质的原理是蛋白质分子质量的大小 为什么不是蛋白质分子的大小呢？？

在大多数情况下，蛋白质分子量或者分子大小都可以因为一般对于球形蛋白，分子量越大的分子半径也越大实际上还和蛋白质形状有关系你的理解是蛋白质根据大小区别排阻，就是在凝胶色谱中走过的路径，其实也是对的，事实上，很多情况下说蛋白质分子大小还更确切一些不需要死扣这些，除非你要应付考试

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